產(chǎn)品簡介：

  增強型轉(zhuǎn)染試劑是在前幾代轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上再次創(chuàng)新，包含最為先進的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，追求更優(yōu)越的轉(zhuǎn)染性能。增強型轉(zhuǎn)染試劑具有更好的轉(zhuǎn)染效率，并提高細胞活性，適用于較難轉(zhuǎn)染及常見細胞的轉(zhuǎn)染。

  產(chǎn)品特點：

  1. 更為優(yōu)越的轉(zhuǎn)染性能，為較難轉(zhuǎn)染的細胞系提供了較高的轉(zhuǎn)染效率;

  2. 對細胞更為溫和，毒性更低;

  3 .較其他轉(zhuǎn)染試劑具有更高的轉(zhuǎn)染效率且用量低;

  4.適用細胞更為廣泛。

  操作步驟：(以六孔板的貼壁細胞DNA轉(zhuǎn)染為例)

  1. 細胞準備。轉(zhuǎn)染前一天將細胞接種至六孔板內(nèi)，細胞接種數(shù)量視其生長速度和細 6 胞系類型而定，一般為0.5-1×10 個細胞。轉(zhuǎn)染時要求細胞生長的匯合度為70~90%，轉(zhuǎn) 染前兩小時對細胞進行換液。(細胞狀態(tài)與轉(zhuǎn)染效果影響很大，選擇最佳的細胞狀態(tài)更有利于轉(zhuǎn)染效率提高和轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)的恢復(fù));

  2. 將3.75μl和7.5μl的R300-Lipo增強轉(zhuǎn)染試劑分別加至另外125μl無血清的OPTI-MEM培養(yǎng)基中，輕輕混勻，室溫靜置2-3分鐘;

  3. 將5μg質(zhì)粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無血清OPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋，制備DNA 預(yù)混液勻，然后添加10 μl RZ523-Lipo輔助試劑并充分混勻;

  4. 在每管已稀釋的R300-Lipo增強轉(zhuǎn)染試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘;

  5.將DNA和R300-Lipo增強轉(zhuǎn)染試劑混合液滴加至六孔板的孔內(nèi)，前后左右晃動孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

  6.轉(zhuǎn)染18-48小時后，倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達，或加入抗性培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達細胞系單克隆。

  用量參照表：

  1. 轉(zhuǎn)染siRNA至細胞時，遵循如上所述的DNA實驗方案，但在稀釋siRNA 時不要加入R300輔助試劑。在無血清培養(yǎng)基中制備 DNA-R300-Lipo增強轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物，直接將其加入含細胞培養(yǎng)基的細胞中(有無血清或抗生素均可);

  2. 轉(zhuǎn)染后無需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物或者更換/添加培養(yǎng);

  3. 整個實驗過程避免細胞污染，由于不同細胞耐受性不同，我們建議您在做批量實驗前，可根據(jù)實際質(zhì)粒和細胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同梯度量先做預(yù)實驗，摸索最佳DNA和RZ523-Lipo增強轉(zhuǎn)染試劑的混合比例。步驟里面測試推薦的兩種濃度的并非固定濃度，優(yōu)化后可根據(jù)自身細胞情況調(diào)整用量。