無血清細(xì)胞凍存液的操作規(guī)范：

  1、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚期，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等。選擇狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作(注：貼壁生長細(xì)胞，用胰蛋白酶消化并用完全培養(yǎng)基終止消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);懸浮生長細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù))。

  2、500～1000g離心5min，棄上清。

  3、?加入適量的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1～10×106/ml，置于凍存管中密閉。

  4、采取逐級降溫保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃?過夜，最后置于液氮罐中長期存儲。

  注意：

  務(wù)必超凈工作臺內(nèi)無菌操作，避免污染。

  雜交瘤細(xì)胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇，以檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。